小编之前推送过一些自己设计引物的用法,也够详细,见下面链接:
手把手教你设计PCR引物
RNAseq终极篇章qPCR
但是设计出引物仍旧P不出来,可如何是好。尤其对于我们第一次设计引物的,还是比较恐怖自己设计的好不好,能不能用问题。
科学总是在不断发展,最近发表的两个数据库,对于我们设计引物小白来说,简直就是福利了,不用自己去摸条件设计引物了,直接查阅即可了。主要的参考文献如下:
LuK,LiT,HeJ,etal.qPrimerDB:athermodynamics-basedgene-specificqPCRprimerdatabasefororganisms[J].NucleicAcidsResearch,.
SangJ,WangZ,LiM,etal.ICG:awiki-drivenknowledgebaseofinternalcontrolgenesforRT-qPCRnormalization.[J].NucleicAcidsResearch,.
实时定量PCR是一种能够对目标基因的表达量进行准确定量分析的试验技术。与传统的基因表达检测方法相比,该技术具有灵敏度高、特异性强、低样品需求量及检测范围广等特点。因此,实时定量PCR技术已经被广泛地应用于分子生物学的研究当中。然而,内参基因以及qPCR引物的特异性和扩增效率直接关系到实时定量PCR结果的准确性和精确性,因此筛选出合理的内参基因,设计出高质量的qPCR引物对实时定量PCR至关重要。近日,北京基因组研究所生命与健康大数据中心开发的国际上首个实时定量PCR内参基因知识库ICG,与西南大学农学与生物科技学院等单位研究构建的qPCR引物数据库qPrimerDB,相辅相成,相信大家以后再也不用为荧光定量而烦恼。下面就这两个数据库做一个简单的介绍。